在体外,外界因素很容易引起血小板的活化,使用离心管离心也可以引起血小板的活化和破坏。实验的目的不仅仅是获得血小板浓度高的PRP,并且还希望所得到的血小板保持未活化的状态,这样在其后的使用中才能释放出尽可能多的生长因子。
P选择素又名CD62P或者GMP- 140,是血小板活化的特异性标志,同以往的PF4, TXB2等相比具有很高的特异性。当血小板活化时,一方面,血小板内的a颗粒膜与开放管道系统融合,a颗粒内的CD62P随之出现在血小板膜表面,而静止状态的血小板表而是没有CD62P表达的,所以可以通过流式细胞技术检测血小板表而的CD62P的表达率来反应血小板的活化率。另一方面,CD62P可释放入血液,以微颗粒的形式存在于血浆中,成为血浆P选择素的主要来源,所以用E-LASA的方法检测血浆P选择素浓度同样可以反应血小板活化程度。
实验采用ELISA的方法检测4种不同的离心方法制备出的PRP中血浆P选择素浓度,并用相应的血小板计数进行归一化。研究结果发现使用一次性离心管离心方法的不同导致制备的PRP血小板P选择素浓度不同。离心方法二和四所制备的PRP血浆P选择素浓度低于离心方法一和三,且离心方法二稍低于离心方法四。结果表明离心方法二制备PRP,不仅有较高的血小板回收率和血小板浓度,对血小板的活性也影响较小。
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